实验原理:细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA,可产生180-200bp的DNA片段。基因组DNA断裂时,暴露的 3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxy nucleotidyl Transferase,TdT)的催化下,加上荧光素(FITC)标记的dUTP,从而可以通过荧 光显微镜或流式细胞仪进行凋亡的检测。在此基础上接辣根过氧化物酶标记的荧光素抗体,可进一步放大检测信号,可在普通显微镜下观察实验结果。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂,因而没有3’-OH形成,很少能够被染色。
分类:Tunel染色分为普通法和荧光法两种。
用途:可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞凋亡测定,灵敏度比一般的组织化学和生物化学高。
样本要求:
1、石蜡切片:取下适当的新鲜的组织块固定于4%-10%浓度的多聚甲醛或中性甲醛中,甲醛与组织块体积比在10:1和20:1之间,4度保存运输。
2、冰冻切片:取下的新鲜组织应立即放入超低温冰箱或者液氮中,用干冰运输,固定好的切片应于-80或者-20度保存,并尽快用于检测。
3、细胞爬片:细胞爬片4%多聚甲醛固定30分钟,换PBS缓冲液4度保存运输,并尽快用于检测。
提供的服务:包含试剂盒,切片,染色,拍照,每个样本提供一张照片包含凋亡率。